Revista Científica UDO Agrícola Volumen 9.
Número 4. Año 2009. Páginas: 848-856
Caracterización cultural,
morfológica, patogénica e isoenzimática de
aislamientos de Colletotrichum gloeosporioides Penz., causante de la antracnosis del aguacate (Persea americana Mill.)
en Michoacán, México
Cultural,
morphological, pathogenic and isoenzymatic charaterization of Colletotrichum gloeosporioides Penz. isolates causing anthracnose
on avocado (Persea americana
Mill.) in Michoacán, México
José Luciano MORALES GARCÍA
1, Hilda Susana AZPÍROZ RIVERO2 y
Martha Elena PEDRAZA SANTOS1
1Facultad
de Agrobiología “Presidente Juárez” Universidad
Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, México y 2Instituto Nacional
de Investigaciones Forestales, Agricolas y Pecuarias
(INIFAP). Campo Experimental Valle de México. km 18,5 Carretera Los
Reyes-Lechería, Chapingo, Texcoco, México.
E-mails: jluciano@umich.mx y
jluciano@prodigy.net.mx Autor para
correspondencia
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Recibido: 31/01/2009 |
Fin de primer arbitraje:
17/03/2009 |
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Primera revisión recibida: 27/08/2009 |
Aceptado: 28/08/2009 |
RESUMEN
Inspecciones
fitosanitarias de huertos de aguacate cv. Hass en las
diferentes zonas agroecológicas de Michoacán revelan variabilidad de síntomas
atribuidos a Colletotrichum gloeosporioides Penz. El objetivo fue detectar variantes de C. gloeosporioides
mediante criterios morfológicos, culturales, patogénicos e isoenzimáticos.
Se colectaron frutos de aguacate cv. Hass con
síntomas de antracnosis, de viruela, con manchas superficiales café brillante y
con cuarteaduras en la lesión en los municipios de Uruapan, San Juan Nuevo, Tancítaro, Peribán y Tacámbaro en
Michoacan, México. El hongo C. gloeosporioides fue aislado de frutos de aguacate cv. Hass
pero Pestalotiopsis versicolor (Speg.) Steyart también fue
aislado de síntomas similares a los de antracnosis. Frutos en la etapa
fenológica de madurez fisiológica fueron los más susceptibles a la infección de
C. gloeosporioides.
Se determinaron variantes (v) de C. gloeosporioides a partir de 42 cultivos monoconidiales, con base en los criterios siguientes: 1.
Cultural: a) por la forma y color de la colonia: 11 v; b) por la velocidad
de crecimiento de la colonia: 19 v; 2.
Morfológico: a) por el tamaño de conidios: 23 v; b) forma del conidio: 4 v; 3.
Patogénico: a) diámetro de las lesiones:
9 v, b) firmeza de la lesión: 6 v, c) peso de la pulpa invadida: 3 v, d)
susceptibilidad a oxicloruro de cobre, maneb, thiabendazol y benomil: 17, 23, 5
y 7 v., respectivamente. 4. Isoenzimática: se
diferenciaron 14 v de las cuales tres
fueron sobresalientes, dos presentaron diferencia en 50% y una en 25% de los loci estudiados. El municipio de Uruapan presentó mayor
número de variantes de C. gloeosporioides, seguido por San Juan Nuevo.
Palabras clave:
Aguacate, antracnosis, Colletotrichum, Gloeosporium, Pestalotiopsis, isoenzimas,
variantes.
ABSTRACT
Orchard phytosanitary inspections of avocado cv. Hass in different agroecological zones of Michoacán, Mexico revealed symptoms
variability attributed to Colletotrichum gloeosporioides Penz. The
objective was to detect variants of C. gloeosporioides by morphological, cultural, isoenzymatic and pathogenic criteria. Fruits of avocado cv.
Hass were collected with anthracnose symptoms, with glossy brown surface spots
with cracks in the lesion in the municipalities of Uruapan, San Juan Nuevo, Tancítaro, Peribán and Tacambaro in Michoacan, Mexico.
The fungus C. gloeosporioides
Penz was isolated from Hass avocado fruits but Pestalotiopsis versicolor (Speg.) Steyart was also isolated
from similar spots. Fruits at the
physiological maturation stage were most susceptible to C. gloeosporioides infection. C. gloeosporioides
variants were determined from 42 monoconidial
cultures, based in the following criteria: 1. Cultural: a) by the shape and
color of the colony: 11 variants (v), b) by the growth rate of the colony: 19
v; 2. Morphological: a) by the conidial
size: 23 v., b) by the conidial shape: 4 v.; 3. Pathogenic: a) diameter of the
lesions 9 v.; b) firmness of the lesion: 6 v.; c) weight of the damaged flesh: 3 v.; d) susceptibility
to cooper oxiclorure, maneb, thiabendazol and benomyl: 17, 23,
5 and 7 v. respectively. 4. Isoenzymatic: a) by isoenzymes 14
v. were differentiated, three of them were outstanding (two presented a
difference of 50% and one in 25% of the loci studied). Municipality Uruapan
presented the greatest number of C. gloeosporioides variants, followed by San Juan Nuevo.
Key words:
Avocado, anthracnose, Colletotrichum, Gloeosporium, Pestalotiopsis, isoenzymes,
variants.
INTRODUCCIÓN
Inspecciones fitosanitarias de huertos de aguacate cv. Hass en las diferentes zonas agroecológicas de Michoacán
revelan variabilidad de síntomas atribuidos a
C. gloeosporioides Penz. (Morales, 1996). Estudios sobre la
determinación de variantes de C. gloeosporioides en aguacate en
México no existen. En el ámbito mundial se reporta a C. gloeosporioides Penz
var. minor Simonds
causante de la antracnosis del aguacate cultivar “Fuerte” en la costa de
Australia (Fitzell, 1987). Aislamientos de frutos de
aguacate con síntomas de antracnosis presentaron variación del color de las
colonias, que contrastan con la descripción de colonias de color gris oscuro
para C. gloeosporioides, así como la variación en tamaño y forma de los conidios que han
servido para separar especies de Colletotrichum en
fresa (Mordue, 1971).
Los síntomas de antracnosis dependen del órgano que es
atacado y pueden ser ocasionados por tres especies de Colletotrichum y por el género Gloeosporium (Pamela y Douglas,
1992). Por otro lado, también se han observado diferentes respuestas en el
control químico del hongo en el campo. Todo esto sugiere la variación genética
de C. gloeosporioides
en aguacate.
La finalidad de esta investigación fue detectar
variantes de Colletotrichum gloeosporioides
mediante criterios morfológicos, culturales e isoenzimáticos.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se colectaron frutos de aguacate cv. Hass con síntomas de antracnosis, de viruela, con manchas
superficiales café brillante y síntomas de antracnosis con cuarteaduras en la
lesión (Figura 1) en los municipios de Uruapan, San Juan Nuevo, Tancítaro, Peribán y Tacámbaro en
Michoacan, México. Las muestras de tejido enfermo se sembraron en PDA, a los
dos días se reaislaron y se obtuvieron 26
aislamientos puros de Colletotrichum gloeosporioides.
Los cultivos puros se colocaron en luz artificial continua por ocho días para
inducir esporulación abundante. Posteriormente los conidios se diluyeron (10-
Los criterios
para diferenciar variantes entre los
42 cultivos monoconidiales fueron los siguientes:
Cultural
a)
Forma y color de
la colonia. La descripción de esta característica se realizó visualmente cuando
los hongos llenaron la caja Petri.
b)
Crecimiento de la
colonia. Cada cultivo monospórico se colocó en cajas
Petri. Una rodaja de 0,7 cm de diámetro de medio de cultivo PDA con micelio se
incubó a
Morfológico
a)
Medición de
conidios: Se midieron 100 conidios al azar. Se determinó el tamaño y la forma
de los conidios
Patogénico
a)
Diámetro de la
lesión. Frutos de aguacate del cv. Hass a tres
cuartos de madurez fisiológica y sin síntomas externos se desinfestaron y se les
hicieron tres perforaciones con un sacabocados esterilizado de
b)
Firmeza de la
lesión. Se midió 24 hr después de que las manchas de
los frutos coalescieron; se empleo
un texturómetro universal con un puntal de 250 g/10
s, (unidades en mm de penetración), colocado a 0,5 cm de distancia del borde
del orificio donde se realizó la inoculación.
c)
Peso de la pulpa
invadida. La cáscara de los frutos se separó a los 19 días después de la
inoculación y la pulpa se pesó en una balanza analítica.
d)
Susceptibilidad a
fungicidas in vitro: en el centro de
una caja Petri con PDA se colocó una rodaja de 0,7 cm de diámetro de medio de
cultivo con micelio; en forma de cruz,
pegado a la orilla de la caja, se colocó un
disco de papel filtro de 0,7 cm de diámetro saturado con cada fungicida
(oxicloruro de cobre 3000 ppm, maneb 2000 ppm, benomil 700 ppm y thiabendazol
700 ppm con tres repeticiones cada uno); las cajas de Petri se introdujeron en
una incubadora a 28,5°C y cada 24 hr se midió el
desarrollo del micelio durante ocho días.
Isoenzimático
a)
Caracterización por isoenzimas. El
micelio (50 mg) de cada uno de los 42 monoconidiales
se colocó en tubos Eppendorf, adicionando 100 µl de
Buffer de extracción. La muestra se licuó para romper las paredes de las
células de las hifas del hongo, y se colocaron en un ultracongelador
a -70 °C hasta que se utilizaron.
Para
la preparación del gel se usó la técnica descrita por Goodman
y Stuber (1988) con ligeras modificaciones. En uno de
los extremos del gel se realizó un corte transversal para insertar las
muestras. Para tomar las muestras de las alícuotas previamente descongeladas se
introdujo una mecha de papel filtro de 11 x
Al término de la corrida se procedió
al revelado de los sistemas enzimáticos específicos de acuerdo con cada tipo de
gel. Para el gel C: Alcohol deshidrogenasa (ADH), esterasa
(EST), transaminasa glutámico oxaloacetica (GOT).
Para el D: shikimato deshidrogenasa (SAD), fosfoglucomutasa (PGM), fosfohexosa
isomerasa (PHI), 6-fosfogluconato deshidrogenasa
(6-PGD), malato deshidrogenasa (MDH), malato deshidrogenasa (MDH), enzima malica (ME), fosfatasa ácida (ACPH).
El gel se extrajo
de la cámara fría, se secó y se depositó en una tabla de acrílico; con un arco
se cortaron cinco rebanadas longitudinales de
La
etapa fenológica de frutos de aguacate más susceptible al ataque de Colletotrichum gloeosporioides, se determinó inoculando once frutos por
cada uno de diez diferentes tamaños seleccionados (Cuadro 1). La inoculación se
realizó con 10 cultivos monoconidiales tomados al
azar. Los frutos inoculados se colocaron en cámara húmeda para promover el
desarrollo del hongo.
|
Cuadro
1. Diferentes tamaños de frutos de aguacate cv. Hass
inoculados con cultivos monoconidiales de Colletotrichum gloeosporioides
aislados en diversos Municipios de Michoacán, México. |
|
|
Tamaño del fruto |
Longitud x Ancho (cm2) |
|
I |
10,89 x 7,63 |
|
II |
9,72 x 7,36 |
|
II |
8,96 x 6,93 |
|
IV |
7,95 x 6,24 |
|
V |
6,85 x 5,41 |
|
VI |
5,81 x 4,47 |
|
VII |
4,75 x 3,7 |
|
VIII |
3,9 x 3,2 |
|
IX |
2,9 x 2,4 |
|
X |
1,95 x 1,4 |
|
XI |
1,4 x 1,1 |
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los hongos Colletotrichum gloeosporioides,
Pestalotiopsis versicolor (Speg.) Steyart y Phomopsis perseae Zerova. se aislaron de frutos
colectados de los diferentes municipios (Cuadro 2). Mediante los postulados de
Koch se logró la reproducción de los síntomas con los dos primeros. Pestalotiopsis versicolor se
aisló de manchas similares a las de antracnosis, con la diferencia de que esta
última formó estromas inconspicuos. Lo anterior es de
gran importancia, ya que comúnmente se confunden los síntomas de Pestalotiopsis versicolor
con C. gloeosporioides, por lo que la
fruta es rechazada para exportación ocasionando grandes pérdidas a los
productores, siendo que el ataque de Pestalotiopsis versicolor se
presenta sólo en la cáscara y no daña la pulpa. Los síntomas y sus estromas se
enmascaran al oscurecerse el fruto cuando alcanza la madurez de consumo,
pasando inadvertidos por el comprador. Este es el primer reporte de Pestalotiopsis versicolor
atacando frutos de aguacate; ya que sólo se encontró una referencia que indica
que este hongo se presenta en forma
ocasional causando daños ligeros en hojas terminales, limitando su ataque
únicamente en árboles criollos de aguacate (Martínez, 1977).
|
Cuadro 2. Hongos aislados de frutos de aguacate con diversos
síntomas de antracnosis y colectados en diferentes localidades del estado de
Michoacán, México durante 1994/95. |
|||||
|
Localidad |
Síntomas |
Hongo aislado |
Número monoco-nidiales |
Frecuencia (%) |
|
|
Uruapan Jucutacato |
Antracnosis y estroma superficial Viruela |
Cg Pv Pp Cg |
7 |
16,66 |
|
|
Toreo el Alto |
Viruela |
Cg |
5 |
11,90 |
|
|
CEFBC |
Manchas brillantes y estroma superficial |
Cg Pv Pp |
6 |
14,28 |
|
|
San Juan Nuevo Milpillas |
Cuarteaduras |
Cg Cg |
8 |
19,04 |
|
|
Tancítaro
Agua Fría |
Viruela Manchas brillantes |
Cg Cg Pp |
6 |
14,28 |
|
|
Peribán |
Viruela |
Cg |
5 |
11,90 |
|
|
Tacámbaro |
Viruela |
Cg |
5 |
11,90 |
|
|
Cg = Colletotrichum gloeosporioides; Pv = Pestalotiopsis versicolor; Pp = Phomopsis perseae |
|||||
Se obtuvieron 42 cultivos monoconidiales
de C. gloeosporioides,
cinco monoconidiales (1-5) correspondieron a los
aislamientos obtenidos de la localidad Toreo el Alto, ocho (6-13) de San Juan Nuevo, siete (14-20) del
municipio de Uruapan, seis (21-26) de Tancítaro,
cinco (27-31) de Tacámbaro, cinco (32-36) de Peribán
y seis (37-42) del Campo Experimental Forestal “Barranca del Cupatitzio”.
Al inocular
el hongo en 11 tamaños de fruto,
se observó que los primeros diez no desarrollaron ningún síntoma; sin embargo,
se logró determinar que los frutos
fueron susceptibles al desarrollo del hongo hasta la etapa fenológica de
madurez fisiológica sin importar el tamaño del fruto, tres a cuatro días
después de cosechado. Lo anterior ha sido explicado porque la cáscara de frutos
inmaduros de aguacate contiene un compuesto antifungal
preformado identificado como 1-acetoxy-2-hidroxy-4-oxo-heneicosa-12,15-dieno, el cual inhibe el desarrollo del
hongo mientras su concentración sea de 1200 µg/g, misma que se mantiene
mientras el fruto está inmaduro, y decrece durante la maduración (Prusky et al,
1982 y 1985).
Criterios utilizados para diferenciar variantes
Para cada criterio se efectuaron tres repeticiones;
para el tamaño de conidios, se midieron
100, tomados al azar por cada monoconidial y para la
forma de los mismos se consideró la predominante en 100 conidios. Se
consideraron tres repeticiones, ya que trabajos similares reportaron
consistencia con dos o tres repeticiones y midiendo 25, 30, 50 y 100 conidios (Denoyes y Baudry, 1995; Pamela y
Douglas, 1992; Smith y Black, 1990).
Cultural
a) Forma y color de la colonia. Se identificaron once
variantes con base al aspecto y color del micelio y la formación de anillos
concéntricos (Cuadro 3); esta variabilidad fue mayor que la encontrada por
Agostini et al (1992) y Denoyes y Baudry (1995). El color de la colonia se ha
utilizado para separar las especies de Colletotrichum fragariae, C. acutatum y a C. gloeosporioides en fresa apoyándose con otros criterios
como forma de conidios y el color del medio de cultivo (Agostini et al., 1992).
b) Crecimiento de la colonia en PDA. Se determinaron 19
variantes (v); indicativo de alta variabilidad de C. gloeosporioides o que este criterio es
de poco peso para separación de variantes (Cuadro 3). Sin embargo, este método
sigue utilizándose en la separación de especies de Colletotrichum; Denoyes
y Baudry (1995) separaron 16 aislamientos aislados de
fresa, 14 se identificaron como C. acutatum, dado su lento crecimiento, y 2 como C.
gloeosporioides por su rápido crecimiento.
|
Cuadro 3. Separación por nueve criterios de variantes de Colletotrichum gloeosporioides,
aislados en Michoacán, México durante 1994/95 |
|
|
Criterio |
Variantes |
|
1. Tamaño de conidios |
23 |
|
2. Forma de conidios |
4 |
|
3. Crecimiento de la colonia |
19 |
|
4. Forma y color de la colonia |
11 |
|
5. Diámetro de la lesión |
9 |
|
6. Firmeza de la lesión |
6 |
|
7. Peso de la pulpa invadida |
3 |
|
8. Susceptibilidad a: Maneb Oxicloruro de cobre Benomil Thiabendazol |
23 17 7 5 |
|
9. Isoenzimas Isoenzimas
sobresalientes |
14 3 |
Morfológico
a) Tamaño de conidios. Se agruparon 23 variantes
(Cuadro 3). Este criterio se empleó como una herramienta de peso en la
separación de especies de Colletotrichum gloeosporioides, C. fragariae y C. acutatum (Denoyes y Baudry, 1995).
Variantes de C. gloeosporioides en mango han sido
caracterizadas por el tamaño de sus conidios, sin embargo, no se especificó el
número de estos (Alahakoon et al., 1992).
b) Forma de conidios. Por la forma de conidios se
diferenciaron cuatro variantes (Cuadro 3
y Figura 2). Saccardo (1991) definió los conidios de C. gloeosporioides
como típicamente rectos y cilíndricos,
redondeados en su parte terminal. Esto contrasta con lo encontrado en el
presente trabajo, donde se observaron
conidios cilíndricos, y otros de forma oval y elipsoide-fusiforme, lo que
concuerda con Pamela y Douglas (1992).
Además se localizaron conidios con forma cacahuatoide, y seis cultivos monoconidiales
con conidios elipsoides-fusiformes, similares a los reportados por Maas (1978), como Gloeosporium sp.; estos seis aislamientos no produjeron setas durante
los 30 días que se revisaron; a diferencia del resto, que a los 15 días ya las
presentaban. Los cultivos monoconidiales, en el
presente estudio, fueron obtenidos por aislamientos de C. gloeosporioides que formaron setas; seis de estos subcultivos no las produjeron, por lo que Gloeosporium podría ser una variante de Colletotrichum, ya que la única diferencia entre los
dos géneros es la ausencia o presencia de setas. El género Gloeosporium pareciera ser una
variante de C. gloeosporioides
sin la capacidad de formar setas.
Patogénico
a) Diámetro de la lesión. El diámetro de la lesión
desarrollada en frutos de aguacate inoculados se usó para medir la patogenicidad de los
cultivos monoconidiales. Este criterio es aceptable
para diferenciar especies de Colletotrichum, según
Maas (1983) y Smith y Black (1990). Asimismo fue
utilizado por Miles y Lenné en 1984 y Lenné y Burdon en 1990, para separar
variantes de C. gloeosporioides aislados de Stylosanthes guianensis (planta forrajera), encontrando amplia variabilidad. En el
presente trabajo se agruparon nueve variantes patogénicas.
b) Firmeza de
la lesión. La firmeza de lesión no se ha empleado para diferenciar especies ni
variantes, pero en el presente estudio se usó como un criterio complementario.
Se determinaron seis variantes y se realizó un análisis de correlación canónica entre las variables
morfológicas (crecimiento de micelio y
tamaño de conidios) y las patogénicas (tamaño y firmeza de la lesión). No se
encontró relación entre éstas, sin embargo, sí la hubo en el análisis de
correlación simple entre el tamaño de conidio y el de la lesión que mostró una
correlación positiva, desde 0.6143 para el monoconidial
34 hasta el 0.9666 para el monoconidial 11.
c) Peso de la pulpa invadida. Diecinueve días después
de la inoculación se definieron tres variantes. Aun cuando este criterio no se
había usado anteriormente, la separación de las tres variantes coincide con el
número de aquéllas agrupadas por el criterio de isoenzimas.
Esta coincidencia debe probarse con más repeticiones, ya que si los dos criterios pudieran usarse con la misma
efectividad sería de gran utilidad práctica.
d)
Susceptibilidad a fungicidas in vitro.
Se determinaron 17 variantes para el oxicloruro de cobre, 23 para el maneb, siete para
el benomil. y cinco para el thiabendazol. La mayor variabilidad ocurrió con los
productos de contacto, (oxicloruro de cobre y maneb).
La variación se debe probablemente al desarrollo de resistencia del hongo a
estos productos. Sin embargo, esta aseveración requiere de confirmarse en
campo, ya que la variación genética, por la susceptibilidad a fungicidas, no
explica en 100% la variación, pues es más común que desarrolle resistencia a
productos sistémicos y no a los de contacto como sucedió en este caso, quizás
esto se deba a la alta frecuencia de las aplicaciones de estos productos y al
largo tiempo que tienen de usarse en la zona aguacatera de donde se aislaron
los monoconidiales estudiados. Por tanto este
criterio sólo se empleó como un complemento a los anteriores.
Isoenzimático
a) Caracterización
por isoenzimas. Mediante este criterio se diferenciaron
14 variantes, utilizando diferentes combinaciones de alelos de ocho sistemas isoenzimáticos. Desde el punto de vista morfológico,
existen 23 variantes, y de acuerdo con los ocho sistemas isoenzimáticos
se tienen 14 variantes genotípicas; nueve de las variantes se ligan a los monoconidiales de manera individual y cuatro dadas por la
combinación de los ocho sistemas agrupan desde tres hasta 15 individuos. Este
estudio preliminar indica que es posible encontrar algunos loci
en otros sistemas isoenzimáticos que discriminen a
esos tres grupos.
Se registraron un total de 8 loci
con 14 alelos. A los loci y alelos que mostraron
mayor migración en el zimograma se les dio el número
uno, a los siguientes el número 2 y así sucesivamente hasta llegar a los más
cercanos al origen. Se consideraron como genotipos sobresalientes aquellos que
presentaron alelos diferentes a los de la mayoría de las muestras, es decir, en
porcentaje igual o menor a 0.05%. La esterasa mostró
un alto nivel de polimorfismo, dando por resultado nueve genotipos diferentes.
De los 14 sistemas enzimáticos utilizados para la
identificación de variantes del hongo sólo seis resultaron apropiados para la caracterización isoenzimática, ya que mostraron un patrón de bandeo con
suficiente resolución y actividad adecuada para usarse como patrones:
Transaminasa glutámico oxaloacético (GOT), Fosfoexosa isomerasa (PHI), b-Glucosidasa (b-GLU), Fosfoglucomutasa
(PGM), Esterasa (EST) y Catalasa (CAT).
El uso de isoenzimas para la
determinación de variantes en hongos fitopatógenos es
una herramienta que podría auxiliar a otros criterios utilizados hasta la fecha
en la diferenciación de géneros, especies, formas especiales y variantes. Es
importante tomar en cuenta que los estudios de marcadores genéticos han
revelado cierta información sobre la estructura genética de poblaciones de
patógenos en la década pasada, sin embargo, el número de patosistemas
estudiados son muy pocos y la mayoría de
los resultados que se han obtenido, al igual que en el presente estudio, deben
considerarse como preliminares, ya que son adaptaciones de metodologías
desarrolladas para estudiar la variación genética de plantas.
La
variabilidad de C. gloeosporioides
dependió del criterio utilizado (Cuadro 3), así por ejemplo en cuanto a
conidios, fue más útil la forma del conidio que el tamaño para la determinación
de especies (Pamela y Douglas, 1992). La prueba isoenzimática
selecciona la variabilidad por criterios de
presencia de enzimas, las cuales dependen de la composición genética de
los individuos (Bonde, et al., 1991).
El Municipio de
Uruapan presentó el mayor número
de variantes de C. gloeosporioides
para casi la mayoría de los métodos
utilizados, seguido por San Juan Nuevo (Cuadro 4). En estos dos municipios fue donde
se establecieron las primeras huertas de aguacate y por consiguiente C. gloeosporioides ha estado durante más tiempo sometido a
presiones diversas que pudieran provocar
mutaciones y la formación de variantes genéticas. En este orden le siguen Tancítaro,
Peribán y Tacámbaro, siendo este último el que menor
variantes tiene, pero también es el más reciente en el cultivo de aguacate. Sin
embargo, existen otros factores como la aplicación indiscriminada de
plaguicidas, el manejo de huertos, suelo y el clima, para los que el hongo
tiene mecanismos de supervivencia que le
permiten cambiar o mutar bajo
condiciones de frío y clima seco, ocasionando, por ejemplo, que las setas del
hongo desarrollen la función de conidióforos y produzcan conidio como lo mencionan
Smith y Black (1990). Esto pudiera
influir en forma directa o indirecta en la aparición de variantes. Otros factores que
influyen para el desarrollo de
variación son las mutaciones y la recombinación sexual, (Miles et al., 1984; Burdon
y Roelfs, 1985), lo que es posible para C. gloeosporioides
en aguacate, ya que la fase sexual se forma en las hojas, ramas y frutos que se
encuentran en el suelo (Escobar, 1985).
|
Cuadro
4. Agrupamiento de variantes de Colletotrichum gloeosporioides de acuerdo con ocho criterios de
separación empleados y su distribución
en Michoacán, México durante 1994/95. |
|||||||||||
|
Municipio |
Forma de conidio |
Isoenzimas |
Diámetro de lesión |
Pulpa invadida |
Firmeza de lesión |
Diámetro de colonia |
Medición de conidios |
Susceptibilidad † |
|||
|
O |
M |
B |
T |
||||||||
|
Uruapan |
3 |
8 |
3 |
2 |
3 |
14 |
16 |
15 |
14 |
4 |
4 |
|
S. Juan Nvo. |
4 |
6 |
3 |
3 |
3 |
8 |
8 |
8 |
7 |
5 |
3 |
|
Táncitaro |
3 |
2 |
4 |
2 |
2 |
4 |
6 |
5 |
5 |
2 |
2 |
|
Peribán |
3 |
1 |
2 |
2 |
1 |
5 |
5 |
5 |
5 |
2 |
2 |
|
Tacámbaro |
4 |
2 |
2 |
2 |
3 |
4 |
4 |
4 |
5 |
3 |
1 |
|
† O = Oxicloruro de cobre; M = Maneb;
B = Benomil; T = Thiabendazol. |
|||||||||||
La variabilidad de C.
gloeosporioides fue alta o baja dependiendo del criterio que
se usó (Cuadro 4). Esto coincide con Liyanage et al., (1992), quienes citan que las
características de la variabilidad dependen del criterio utilizado; así por
ejemplo en cuanto a conidios, es más útil la forma de los conidios que el
tamaño para la determinación de especies (Pamela y Douglas, 1992). Una de las
pruebas que se aceptan como de mayor peso es la isoenzimática;
con este criterio se selecciona la variabilidad por criterios de presencia de enzimas las cuales dependen de la composición
genética de los individuos, por lo que las enzimas pueden ser usadas como una forma importante para identificación
de especies o variantes de Colletotrichum spp., lo que coincidió con lo reportado por Bonde et al.,
(1991).
CONCLUSIONES
El hongo Colletotrichum gloeosporioides Penz fue aislado de frutos
de aguacate cv. Hass pero Pestalotiopsis versicolor (Speg.) Steyart también fue
aislado de síntomas similares a los de antracnosis.
Frutos en la
etapa fenológica de madurez fisiológica fueron los más susceptibles a la
infección de C. gloeosporioides.
Se determinaron
variantes de C. gloeosporioides
a partir de 42 cultivos monoconidiales, con base
en los criterios siguientes: 1. Cultural: a) por la forma y color de la colonia:
11 variantes; b) por la velocidad de
crecimiento de la colonia: 19 variantes; 2. Morfológico: a) por el
tamaño de conidios: 23 variantes; b) forma del conidio: 4 variantes; 3.
Patogénico: a) diámetro de las lesiones:
9 variantes, b) firmeza de la lesión: 6 variantes, c) peso de la pulpa
invadida: 3 variantes, d) susceptibilidad a oxicloruro de cobre, maneb, thiabendazol y benomil: 17, 23, 5 y 7 variantes, respectivamente. 4. Isoenzimática: se diferenciaron 14 variantes de las cuales
tres fueron sobresalientes, dos presentaron diferencia en 50% y una en 25% de
los loci estudiados.
El municipio de
Uruapan presentó mayor número de variantes de C. gloeosporioides, seguido por San Juan
Nuevo.
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